胚胎干細(xì)胞是指來源于著床前囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或早期胚胎原始生殖嵴的原始生殖細(xì)胞的一種多潛能細(xì)胞。1981年，Evans等利用實(shí)驗(yàn)中獲得的延遲著床的囊胚并從中分離培養(yǎng)獲得了增殖且未分化的小鼠囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，培養(yǎng)于 STO(一種已建系的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)飼養(yǎng)層 上，首次分離得到胚胎干細(xì)胞。1998年，Thomson等從體外受精發(fā)育至囊胚階段的人胚胎中分離獲得內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將其接種于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上，經(jīng)分離培養(yǎng)逐漸形成能長期穩(wěn)定傳代的人胚胎干細(xì)胞，首次成功建立了人胚胎干細(xì)胞系。

　　胚胎干細(xì)胞是在體外無限增殖、自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，這種特性使其在誘導(dǎo)分化、遺傳病防治、器官移植等方面具有前景廣闊的臨床應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)在新基因的發(fā)現(xiàn)、新藥開發(fā)、功能基因的組織學(xué)研究、致畸實(shí)驗(yàn)等方面也具有廣泛的應(yīng)用前景。選擇較優(yōu)化的細(xì)胞培養(yǎng)體系對于胚胎干細(xì)胞的研究及臨床應(yīng)用至關(guān)重要。飼養(yǎng)層對胚胎干細(xì)胞自我更新及全能性的維持起重要作用，目前其機(jī)制仍未完全闡明，很大程度上與飼養(yǎng)層所提供的細(xì)胞接觸及復(fù)雜的蛋白分子環(huán)境有關(guān)。

　　小鼠胚胎成纖維細(xì)胞因其取材方便、易于制備和作用效果好等優(yōu)點(diǎn)而成為胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)首選的且較常用的飼養(yǎng)層細(xì)胞。

　　小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層制備：人胚胎干細(xì)胞傳代前1d制備飼養(yǎng)層細(xì)胞。0.1%明膠水溶液加入培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶底部包被培養(yǎng)瓶，置37培養(yǎng)箱孵育2h后備用。取細(xì)胞融合率約90%的第2-4代小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，棄原培養(yǎng)液，將2mL含10mg/L絲裂霉素C及體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液加入培養(yǎng)瓶，置37培養(yǎng)2h。棄絲裂霉素C，用PBS洗5次，每次2min(動(dòng)作要輕柔，以免細(xì)胞層脫落，必要時(shí)可在鏡下觀察細(xì)胞層有無脫落)。加入0.25%胰酶2mL消化，加入等體積的含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液中止消化，并用吸管輕輕吹打瓶底，使細(xì)胞脫壁。收集消化細(xì)胞，800r/min離心5min，棄上清，加含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的DMEM重懸，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。取出經(jīng)明膠包被培養(yǎng)瓶，棄去明膠水溶液，以5.0×105個(gè)/瓶接種細(xì)胞，含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，備用。使用前需換用胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液